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Test di Ames

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Test di Ames

Il test di Ames è un saggio biologico in vitro rapido ed economico utilizzato per valutare il potenziale mutageno di una determinata sostanza chimica, basandosi sulla correlazione esistente tra mutagenicità e carcinogenicità.

Principio di Funzionamento

Il test impiega un ceppo batterico di Salmonella typhimurium ingegnerizzato per essere auxotrofo per l’istidina (ossia presenta una mutazione a carico dell’Operone per la sintesi dell’istidina, un amminoacido essenziale per la sua crescita). Per proliferare, questo ceppo richiede obbligatoriamente l’aggiunta di istidina esogena nel terreno di coltura.

Protocollo Sperimentale

  1. Controllo Negativo (Reversione Spontanea): I batteri auxotrofi vengono piastrati su un terreno solido privo di istidina. In assenza di mutageni, dopo incubazione a 37 °C per 24 ore, la crescita è assente, salvo per la comparsa di pochissime colonie isolate dovute a mutazioni spontanee retromutanti (revertanti) che ripristinano la via di sintesi dell’istidina.

  2. Saggio con il Mutageno: Sulla piastra di coltura priva di istidina viene posto un dischetto di carta imbevuto con la sostanza chimica in esame. Se la sostanza possiede attività mutagena, induce mutazioni nel genoma batterico aumentando la frequenza di reversione. Di conseguenza, si osserverà una crescita massiva di colonie batteriche revertanti distribuite in un alone attorno al dischetto (le quali hanno riacquistato la capacità di sintetizzare autonomamente l’istidina).

Variante con Attivazione Metabolica (Lisato Epatico S9)

Molte sostanze non sono mutagene nella loro forma nativa, ma lo diventano una volta introdotte nell’organismo superiore in seguito al metabolismo epatico (che le trasforma in cataboliti reattivi).

Per simulare questo processo in vitro, il test di Ames prevede una variante in cui alla miscela di coltura (batteri + sostanza in esame) viene aggiunto un lisato di fegato (frazione microsomiale epatica S9) di ratto. Gli enzimi del lisato epatico catabolizzano la sostanza in esame; se i cataboliti generati sono mutageni, si osserva la reversione del ceppo di Salmonella e la crescita colonica, consentendo di identificare i cosiddetti “pro-mutageni”.

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